Как можно заморозить сперму и сохранить ее на несколько лет

Криоконсервация спермы подарила множеству семейных пар счастье стать родителями. Возможности современных технологий позволяют заморозить ткани и клетки. Среди таких достижений науки – крионика, которая среди множества возможностей позволяет длительное время без изменений добиться сохранения в состоянии глубокой заморозки любой биологический материал.

Для чего это необходимо

Впервые рождение ребенка из эмбриона, хранившегося в состоянии криогенной заморозки, стало возможно в 80-е годы ХХ столетия. А в начале XXI в. родился ребенок, зачатый из спермы, хранившейся в состоянии глубокой заморозки два десятилетия. Криоконсервация спермы – процедура, которая проводится по ряду показаний:

1. Криоконсервация помогает сохранить сперму перед проведением лечения онкозаболеваний.
2. Криоконсервация необходима при мужском бесплодии, а также при анэякуляции.
3. Заморозка нужна, если профессия мужчины связана с риском утраты фертильности.
4. При травме спинного мозга или ПНС.
5. Перед стерилизацией и др.

Особенности проведения процедуры

Если заморозить, а затем разморозить любую клетку, то образующиеся в цитоплазме кристаллы льда безвозвратно повреждают ее.

Можно ли заморозить сперму так, чтобы сохранить ее способность? Впервые о сохранении двигательной способности сперматозоидов после заморозки и размораживания сообщил Спалланциани.

В середине XIX века криоконсервация рассматривалась как метод сохранения эякулята солдат, уходящих на войну. Длительное время криоконсервация имела низкую эффективность, так как заморозка клетки до -0,6°С приводила к:

1. Образованию кристаллов льда.
2. Невозможности сохранения ее морфологии.

При медленной заморозке, образуются кристаллы льда, которые повреждают сперму.

Но если клетку заморозить очень быстро, то удается преодолеть зону кристаллизации и добиться сохранения целостности сперматозоида. Зона витрификации достигается за несколько минут при погружении биоматериала в жидкий азот.

Но безопасно заморозить клетки стало возможно только с открытием защитных свойств глицерина.

С введением реагентов диметилсульфоксида и 1,2 пропандиола стала доступна быстрая заморозка, длительное сохранение и безопасная разморозка  сперматозоидов и эмбрионов.

Технология витрификации позволяет достичь таких результатов оплодотворения, которые сравнимы с результатами in vitro.

Криоконсервация методом витрификации требует сочетания высокой концентрации криоконсервантов, которые способны легко проникать через мембрану сперматозоида, и низкой концентрации дегидратирующих веществ, для сохранения клетки снаружи и возможности заморозить ее без излишней дегитратации.

Чтобы избежать токсического воздействия, эякулят на короткое время помещают в витрификационную смесь с последующей быстрой заморозкой. Минимальное количество консервирующего раствора позволяет:

1. Заморозить материал.
2. Обеспечить последующее сохранение спермы в жидком азоте без образования кристаллов льда.

Криоконсервация с применением достижений биотехнологии обеспечивает сохранение оплодотворяющей способности биоматериала после размораживания. А новая японская технология криоконсервации Cryotop (доктор Masashige Kuwayama) позволяет сохранить способность к оплодотворению и делению при заморозке и последующее  размораживание эмбрионов и спермы.

Современная методика интроцитоплазматической инъекции (ICSI) сперматозоидов после размораживания позволяет рационально использовать биоматериал.

В отличие от оплодотворения in vitro, когда требуется огромное количество сперматозоидов, при ICSI в яйцеклетку вводится только один нужный сперматозоид, поэтому качество эякулята после заморозки и последующего размораживания роли не играет.

Оплодотворение ICSI происходит и с помощью сперматид, так как заморозка и оттаивание сохраняют оплодотворяющие способности у 70% клеток.

Для оплодотворения яйцеклетки при ICSI требуется только один здоровый сперматозоид.

Погружение в ледниковый период

Технология заморозки обеспечивает сохранение функции и морфологической структуры гамет. Криоконсервированная сперма сохраняет свои свойства до 3 лет.

Хранение спермы дольше этого времени сокращает количество способных к оплодотворению спермиев после размораживания.

Но отмечены случаи, когда хранение спермы 20 и более лет дало после размораживания необходимое для оплодотворения количество спермиев.

Большое значение хранение спермы имеет для донации. Хранение спермы донора при низкой температуре длительное время исключает возможность заражения реципиента ВИЧ. Несмотря на то, что методики, как хранить сперму, давно и успешно применяются, еще ведутся работы для увеличения срока сохранения биоматериала. Методы криоконсервации делятся на:

1. Медленную заморозку.
2. Витрификацию.

Способ сохранения сперматозоидов и последующее их размораживание практически не отличаются в обеих группах криоконсервации. Различается скорость заморозки, количество и концентрация криопротекторов.

Перед тем как заморозить, биоматериал смешивают с раствором консервантов и помещают в пластиковые соломинки. Их при температуре 4°С и времени от 10 до 30 мин. выдерживают, а затем помещают на полчаса в пары жидкого азота для заморозки.

Замороженная сперма переносится в сосуд Дьюэра для дальнейшего сохранения. Хранение спермы в сосуде происходит при температуре -196°С.

Современные методы криоконсервации используют программируемые компьютерные установки для заморозки семени. Однако заморозить семя в парах азота дешевле. Но при тяжелой стадии патозооспермии такой метод криоконсервации опасен потерей гамет при разбавлении семени криопротекторами, центрифугировании и размораживании. Использование витрификации при криоконсервации позволяет:

1. Мгновенно заморозить сперматозоиды.
2. Снизить их потерю.

Для заморозки семени используют программируемые компьютерные установки.

Размораживание сперматозоидов производят в каплях витрификационной смеси. Следующим этапом является инкубация клеток при температуре 37°С в парах 5% СО2. Так после размораживания сперматозоиды будут стоять в соломинках до момента использования. Такой метод криоконсервации обеспечивает сохранение даже единичных гамет.

Заморозить материал так, чтобы не повредить носитель генной информации, проще, чем при размораживании обеспечить сохранение целостности клетки. Размораживание должно произойти со скоростью, соответствующей заморозке. Для этого применяют несколько методов размораживания:

1. При комнатной температуре.
2. На водяной бане, при t= 37°С.
3. В программируемой криокамере с обратной программой размораживания.

Перед криоконсервацией часть материала могут заморозить, а после размораживания оценить жизнеспособность спермиев и возможность проведения криоконсервации для всего объема семени.

Замораживать и размораживать биоматериал эффективнее под контролем компьютера, что повышает сохранение гамет. Перед тем как заморозить семя, его тестируют. Для сохранения важны и условия забора эякулята, поэтому его не проводят в домашних условиях.

Сколько стоит заморозить сперму? Много факторов влияет на цену процедуры. Возможность заморозить сперму позволяет родить собственного ребенка.

Источник: https://egopik.ru/fertilitatem/kriokonservaciya-zamorozka-spermy

Как сохранить сперму

Несмотря на существующее заблуждение, мужское бесплодие встречается не реже женского. По данным Минздрава, в 45 % случаев бесплодие пары можно объяснить теми или иными трудностями, возникающими у мужчин.

Проблемы могут быть вызваны различными причинами: инфекциями, травмами, вредными привычками, побочным действием лекарственных средств, заболеваниями и пр. К сожалению, полностью обезопасить себя от влияния всех этих негативных факторов на организм невозможно. Иногда профессиональная деятельность также может стать причиной потери репродуктивной функции.

(Подробнее об этом — в статье «10 профессий, приводящих к бесплодию»). Таким образом, мы рекомендуем сохранить свой репродуктивный материал всем мужчинам без исключения, но в особенности тем, чья работа приносит вред здоровью или связана с риском для жизни, а также тем, кто готовится пройти химиотерапию или к операции на репродуктивные органы.

Сохранение репродуктивных клеток в Репробанке – это биострахование и возможность зачать здоровых детей в любом возрасте и при любых обстоятельствах.

Сперма после криоконсервации может храниться неограниченное количество времени. В медицинской практике известен случай, когда ребенок был зачат с помощью спермы, замороженной 24 года назад. Пациент одного из зарубежных криобанков, заморозил свою сперму в 1972 г.

В возрасте 22 лет после перенесенной операции он потерял репродуктивную функцию. Спустя несколько лет мужчина стал отцом троих детей, зачатых с помощью его собственной замороженной спермы.

Для хранения спермы используют небольшие пробирки – криовиалы, которые помещаются в специальные криохранилища, наполненные жидким азотом. Температура хранения составляет -196°С. Автоматизированное криохранилище постоянно поддерживает нужную температуру, и его работа не зависит от перебоев электричества.

При хорошем качестве спермы из одного образца можно получить от 2 до 4 криовиал. При желании пациент может сохранить все криовиалы и использовать в дальнейшем свои образцы для зачатия детей многократно.

Если результаты спермограммы не удовлетворительные, то можно попробовать сдать сперму еще раз, соблюдая все необходимые правила, или заморозить максимальное количество образцов спермы.

Важно понимать, что одна криовиала – это одна попытка использования спермы в будущем, поэтому, чем больше сохранено криовиал, тем выше шансы стать отцом в будущем. В среднем, 4-х замороженных криовиал достаточно для зачатия и рождения одного ребенка.

Существует миф, что сперму нужно сдавать каждые 2 года, чтобы поддерживать образцы в хорошем качестве. Это совершенно не так.

Достаточно сдать материал один раз, и если результат спермограммы будет соответствовать норме, сохранить образцы. Лучше всего сохранять сперму в молодом возрасте, так как качество репродуктивного материала значительно лучше.

В более зрелом возрасте рекомендуется сохранить как можно больше образцов, чтобы увеличить шансы зачатия ребенка.

Репробанк – это подразделение Института Стволовых Клеток Человека (ИСКЧ), который является лидирующим в сфере биострахования с 2003 года. В криобанке ИСКЧ хранится более 25 000 образцов – это крупнейшее криохранилище в России и Восточной Европе.

Наши специалисты ведут строгий контроль и учет всех образцов. В распоряжении Репробанка современная лицензированная лаборатория, построенная в соответствии со стандартами GLP.

За три года работы, Репробанк стал крупнейшим банком донорской спермы в России, а также банком персонального хранения спермы и яйцеклеток.

Сохранить сперму стоит намного дешевле, чем приобретать донорский образец при необходимости. Стоимость длительного хранения спермы от 3500 руб/год.

Репробанк предоставляет дополнительные скидки на сохранение спермы для онкобольных.

Источник: https://reprobank.ru/faq/sohranenie-spermy

Способы хранения спермы, криоконсервация

Донорская или собственная сперма мужчины может оставаться полезной и год спустя после донации, если она правильно хранится. В России и во всем мире широко распространен метод криоконсервации эякулята.

Хранением занимаются банки спермы, которые существуют сами по себе, а также при клиниках, оказывающих бесплодным парам репродуктивные вспомогательные услуги – ЭКО, инсеминацию.

Есть ли другие способы сохранить биоматериал без потери его качества и как происходит хранение, мы расскажем в этой статье.

Криоконсервация – один из основных способов хранения половых клеток. Воздействие низких температур позволяет сохранить клетку в жизнеспособном состоянии, просто погрузив ее в своеобразный анабиоз, при котором все обменные процессы внутри клетки замедляются. Акросомный аппарат спермиев претерпевает изменения и это не дает клетке утрачивать свои оплодотворяющие способности.

Следует отметить, что анабиозу сперматозоиды подвергаются и в тестикулах хозяина, ведь до момента эякуляции, когда гаметы смешиваются с семенной жидкостью, половые клетки пребывают в полной неподвижности.

Только этот анабиоз имеет химическое происхождение: так гаметы ведут себя под воздействием некоторых кислот.

Свойство сперматозоидов впадать в анабиоз было замечено учеными еще в середине XX века, тогда же и начали эксперименты по их замораживанию.

Когда эякулят понадобится, сперму разморозят, очистят от примесей и семенной жидкости и используют в протоколе ЭКО. Это касается и донорской, и собственной спермы мужчины.

Если к донору предъявляются очень высокие требования, то сдать на хранение свой собственный биоматериал может любой совершеннолетний мужчина. Причин для этого у представителей сильного пола может быть сколько угодно.

Рассмотрим самые распространенные из них.

• Опасная работа, при которой мужчина, который уже женат, но еще не успел завести детей, может погибнуть. При желании супруга сможет воспользоваться спермой супруга для проведения ЭКО.
• Работа на вредном производстве, в условиях радиации, в контакте с нитратами, солями тяжелых металлов, лакокрасочными материалами, которые разрушительно воздействуют на сперматозоиды в частности и мужскую фертильность в целом.
• Предстоящее лечение от онкологического заболевания (во время химиотерапии гаметы, как клетки, которые ведут себя активнее всего, сильно страдают, что потом может привести к бесплодию).
• Предстоящее хирургическое лечение патологий органов размножения или желание мужчины воспользоваться вазэктомией для контрацепции.
• Профессиональный спорт (например, велоспорт или борьба), при котором высок риск травмировать наружные половые органы.
• Травмы спинного мозга и посттравматические параличи (сдать сперму на хранение лучше непосредственно после травмы, поскольку длительная дисфункция спинного мозга отражается на состоянии сперматогенеза. Иногда забор спермы при парализованной нижней части тела возможен только хирургическим путем).

Также в последние годы появляются представители сильного пола, которые планируют воспользоваться программой «отложенного отцовства». Сохранить свой биоматериал мужчина может просто так, без видимых причин, если в ближайшее время он не собирается становиться папой, если еще не встретил любимую и единственную, с которой захотел бы произвести на свет ребенка.

Конечно, мужчина может стать папой и в 70 лет, и история знает немало таких примеров.

Но качество эякулята с возрастом мужчины, увы, не повышается, а плохая экология, прием различных лекарств, вредные привычки могут привести к мутационным процессам в ДНК-наборе его сперматозоидов.

Для того и существует программа отложенного отцовства, чтобы в любом возрасте при необходимости была возможность зачать здорового и полноценного ребенка.

Условия хранения должны быть такими, чтобы после разморозки выжило не менее 60% половых клеток, а основные характеристики эякулята остались неизменными. Только тогда сперма будет пригодна для использования.

Зная, что выживут далеко не все гаметы, мужчине следует подготовиться к сдаче спермы, чтобы повысить ее количественные и качественные показатели.

Так, за 5-6 дней не рекомендуется заниматься сексом и мастурбировать.

В течение пары недель перед сдачей не стоит посещать баню и сауну, носить тесное нижнее белье или обтягивающие модели брюк, которые утягивают таз и могут вызывать нарушения кровообращения в нем.

Мужчина перед сдачей спермы должен питаться полноценно, в его рационе должны присутствовать мясо и рыба, молочные продукты, свежая зелень. Алкоголь противопоказан, а никотин крайне нежелателен. Стоит избегать приема антибиотиков, гормональных препаратов.

Полученную сперму врачи сначала слегка разжижают, а потом помещают в центрифугу, чтобы добиться получения чистой фракции гамет. Около четверти часа материал проводит в емкости с криопротекторной жидкостью. Это необходимо для того, чтобы защитить половые клетки при шоковой заморозке.

Полученные фракции помещают в специальные контейнеры для заморозки. Сначала спермии охлаждают в морозильной камере, затем помещают в жидкий азот, опуская температуру до минус 96 градусов по Цельсию. И только потом, спустя два часа, емкости с центрифугированным эякулятом помещают в специальный сосуд, температура в котором поддерживается на уровне минус 196 градусов.

Хранить в криобанке сперму положено именно при такой температуре. Срок хранения – до 20 лет и даже больше. Любое колебание, даже на 1-2 градуса, может привести к нарушениям функции клеток после разморозки. Именно по этой причине не стоит даже пытаться заморозить сперму самостоятельно.

Ни в морозильнике, ни в холодильнике она храниться не будет. Внутриклеточная жидкость просто превратится в кристаллы льда и порвет оболочки спермия, убив его. Только шоковая заморозка с соблюдением последующих условий, при которых хранят замороженную сперму, может гарантировать, что гаметы сохранят свои свойства, и мужчина сможет стать папой, пусть даже через несколько лет.

Размораживание происходит строго в обратном порядке с соблюдением временных интервалов и температурных изменений. После разморозки сперма должна быть использована в течение 1.5-2 часов.

Этот способ хранения не подразумевает воздействие низких температур на гаметы, но и не гарантирует длительного хранения. Консервация происходит в безэлектролитной среде. Например, спермии могут быть помещены в водный раствор глюкозы. Как и почему половые клетки поддерживают свои основные функции при такой консервации, науке и медицине пока до конца не ясно, но факт остается фактом.

Большой и важный плюс по сравнению с криоконсервацией заключается в том, что во время хранения таким способом не нарушается даже отдаленно целостность калиевых и кальциевых каналов. Спермии практически не погибают при таком хранении.

Однако применять метод можно только тогда, когда спермой планируется воспользоваться в ближайшее время. Длительного хранения этот способ не предусматривает.

Обычно метод может быть применен, если ЭКО с использованием биоматериала назначено через несколько дней после сдачи эякулята.

Врачи отмечают, что иногда спермии в такой среде сохраняют поступательные движения даже после недели хранения, однако оплодотворяющая способность такой спермы уже значительно ниже.

Ученые не раз пытались разработать и другие способы сохранить мужские половые клетки, например, в высушенном состоянии, но ни один из экспериментов пока не увенчался успехом. Таким образом, пока существует всего два способа, о которых мы рассказали выше.

Женщин (да и мужчин тоже) волнует, не отразится ли заморозка или обычная безэлектролитная консервация на качестве полученных эмбрионов и на успешности процедуры ЭКО.

Криоконсервированная сперма имеет все те же характеристики, что и свежая, с той лишь разницей, что часть сперматозоидов погибают при размораживании.

От того, насколько правильно была проведена процедура замораживания, и от того, соблюдались ли все требования при разморозке биоматериала, зависит, каким будет процент потерь.

Оплодотворенная размороженной спермой яйцеклетка ничем не отличается от ооцита, которого оплодотворили свежими сперматозоидами. Процент успешности ЭКО существенно не меняется.

Источник: http://www.o-krohe.ru/vrt/eko/hranenie-spermy-kriokonservaciya/

Донор спермы: ответы на популярные вопросы

Донорство спермы в нашей стране не так популярно, как в Европе и США. У нас проживают тысячи людей, которые награждены знаком «Почетный донор России» за регулярное посещение станций переливания крови, однако в «криохранилища» заглядывают единицы.

И, тем не менее, большое количество ранее бесплодных или одиноких женщин во всем мире стали матерями именно благодаря этому донорскому материалу, сданному неизвестными им мужчинами.

В этой статье можно найти ответы на наиболее популярные вопросы, которые касаются этого пикантного достижения современной медицинской науки.

Зачем может пригодиться донорская сперма, какие требования предъявляют к кандидатам и сколько платят донорам спермы?

Донор спермы — кто это?

Донор спермы — человек мужского пола, который сдает собственную семенную жидкость на хранение. Это необходимо для осуществления в последующем таких способов преодоления бесплодия, как искусственная инсеминация и экстракорпоральное оплодотворение.

Где проводится забор и хранение спермы доноров?

Заведения, где осуществляется забор донорской спермы для дальнейшего замораживания и хранения официально называются термином «криохранилище». Среди населения чаще используется словосочетание «банк спермы», однако в документах его не употребляют.

Для чего может пригодиться донорская сперма?

Мужчина может стать донором спермы по различным причинам. К ним относят следующие:

• Он хочет, чтобы его спермой была искусственно оплодотворена его жена (при отсутствии возможности зачать ребенка естественным образом), однако не сможет лично присутствовать на процедуре. То есть, он сдает сперму заранее.
• Ему предстоит операция на половых органах (удаление половых желез в связи с наличием новообразования, перед химиотерапией или облучением) и он хочет сохранить свой генетический материал для возможного отсроченного применения.
• Добровольная сдача спермы без конкретных целей (по аналогии с донорством крови на станции переливания).
• С целью получения денежного вознаграждения.

Какие обязательства берет на себя донор перед будущим ребенком?

После того, когда донор спермы сдал свой материал в криохранилище, он не имеет никакого отношения к его дальнейшей судьбе. Если впоследствии его сперматозоиды будут использованы и в результате этого родится ребенок, мужчина не обязан ему ничем.

Ни о каких алиментах речь не идет. Донорство спермы — это исключительно добровольное мероприятие и не должно обременять донора никакими последствиями.

Любая женщина, которая идет на это, осознает, что ее ребенок никогда не познакомится со своим биологическим отцом.

Кто может стать донором спермы?

Теоретически, донором спермы может быть любой здоровый человек мужского пола в возрасте 18-35 лет. Внешне он должен обладать правильными чертами тела и лица, то есть, не иметь никаких врожденных или приобретенных внешних отклонений. Однако, для того, чтобы эякулят подошел, мужчина обязан пройти ряд обследований, подтверждающий его годность в качестве донора. В этот список входят:

• Обследование на различные инфекции, которые передаются половым путем. Результат годен на протяжении полугода.
• Отсутствие маркеров вирусных гепатитов типа В, С и ВИЧ-инфекции.
• Спермограмма. В ней учитываются все возможные параметры, которые могут сказаться на ее качестве. Любое отклонение от требуемых цифр делает донорский материал непригодным.
• Генетическое обследование (исключение наследственных болезней).
• Осмотр врачей: терапевта и уролога.
• Обследование на группу крови и резус-фактор.

Некоторые клиники предъявляют к кандидатам в доноры спермы особое требование — консультацию врачей: психиатра и нарколога. Ведь вредные привычки мужчины могут стать причиной серьезных болезней у малыша, зачатого от него.

Что происходит со спермой дальше?

После того, как донор, прошедший все этапы обследования и признанный абсолютно годным для осуществления данной процедуры, сдаст свой эякулят в медицинском учреждении, она подлежит консервации.

В естественном виде сперма сохраняет свои свойства на протяжении считанных часов, поэтому для того, чтобы ею можно было воспользоваться спустя более длительное время, этот материал необходимо заморозить.

Перед заморозкой в материал добавляют криопреципитат, которым является глицерин. Его количество должно составлять 1/10 часть от непосредственно объема спермы. После этого она подлежит двум этапам заморозки: медленному и быстрому.

На первом этапе емкость со спермой помещают в тару с контролируемым хладоэлементом или жидким азотом, и медленно понижают температуру до минус 50°С.

На втором этапе температуру резко снижают до очень низких цифр, и материал оставляют при данных показателях на неопределенное время.

Сколько времени может храниться замороженная сперма?

В замороженном состоянии сперма может храниться много лет, не теряя при этом своих свойств. При необходимости емкость с ней извлекают и размораживают, помещая для этого в тару с теплой водой. Однако происходить это должно непосредственно перед проведением процедуры искусственной инсеминации или экстракорпорального оплодотворения.

Сколько платят донорам спермы?

«Сколько платят донорам спермы?» Ответ на этот вопрос больше всего волнует мужчин, которые бы хотели стать таковыми. Ведь, на первый взгляд, для него это ничего не стоит, в то же время он может получить денежное вознаграждение.

Различные клиники предлагают разные суммы в качестве оплаты этой процедуры: средняя цена колеблется в интервале 2000-3000 рублей за 1 порцию.

Разница в сумме вознаграждения зависит от свойств самого эякулята, поэтому однозначно ответить на такой интересующий всех вопрос, сколько же платят донорам спермы, невозможно.

Может показаться, что это отличный источник дохода. Но, тем не менее, не все так просто.

По закону о донорах спермы, данную процедуру можно пройти не более 8 раз за 1 месяц. Если делать это чаще, то качество спермы не будет отвечать необходимым требованиям.

При этом активная половая жизнь с естественной эякуляцией также будет способствовать снижению качества «продукта».

К тому же, солидный список обследования, необходимый перед прохождением процедуры, дополнительно будет снижать финансовую выгоду от нее.

Конечно, любое донорство, в идеале, должно быть добровольным и бескорыстным. И, тем не менее, доноры спермы — немногие из тех, кто может получить за это финансовое вознаграждение.

Источник: https://MedAboutMe.ru/zdorove/publikacii/stati/sovety_vracha/donor_spermy_otvety_na_populyarnye_voprosy/

Замораживание и длительное хранение спермы быка

Приготовленные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200—400 мл, которые подсоединяют к специальному устройству для разбавления спермы. После получения спермы ее разбавляют средой № 1 в соотношении 1 : 1 и выдерживают при комнатной температуре 5—10 мин. Затем проводят дополнительное разбавление спермы средой № 2 до требуемой концентрации (20—25 млн. в дозе).

Сперму разбавляют с помощью специального устройства, позволяющего дозирование вводить среды в отделенную часть одноразового полиэтиленового спермоприемника со спермой. Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой и выдавливают в нее разбавленную сперму. Заполненную спермой трубку разделяют с помощью автомата АРС-2 на отдельные дозы по 0,33 мл с их герметизацией.

Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают пробками. Контейнеры закрепляют в обоймы специального устройства для эквилибрации и замораживания спермы. Это устройство помещают в холодильник для охлаждения до 2—5°.

После 5—6-часовой выдержки при такой температуре обойму аппарата с контейнерами погружают в емкости с жидким азотом на 8—10 мин.

Активность спермиев после замораживания спермы проверяют спустя 24 п. Из каждого контейнера берут по одной грануле и опускают в воду с температурой 40° для оттаивания.

Гранулу вытирают марлевой салфеткой, с помощью ножниц ее вскрывают и определяют активность спермиев. Для дальнейшего хранения допускают сперму с активностью не ниже 4 баллов.

Для замораживания спермы в необлицованных гранулах ее после охлаждения и эквилибрации накапывают на фторопластовую пластину непосредственно яз спермоприемника.

Замораживание спермы в соломинках (пайеттах).

При замораживании используют полипропиленовые или поливинилхлоридные трубочки длиной 100 мм с внутренним диаметром 2,4 мм, одни конец которых предварительно закрывают специальным герметизирующим составом: парафин ГОСТ 13577—12,0, пентаэритритовый эфир канифоли — 44,8, тальк — 10,1, каучук натуральный — 1,5, глицерин ГОСТ 6259—71—8,0, краситель — 0,1.

Сперму разбавляют трисбуферной средой, содержащей 6,056 г трисбуфера (трисгидрооксиметиламн-нометан), 3,4 г лимонной кислоты, 2,5 г фруктозы, 166,3 мл бидистиллированной воды. Раствор делят на две равные части, к первой добавляют 15,8 мл бидистиллированной воды, 25 мл свежего яичного желтка, 100 тыс.

ЕД антибиотиков, ко второй— 19,7 мл глицерина, желток и антибиотики в тех же количествах. Первый разбавитель добавляют к эякуляту, предварительно доведенному до температуры 25°. Вторую среду медленно добавляют к предварительно разбавленной сперме с таким расчетом, чтобы в соломинке (пайетте) содержалось 20—25 млн. подвижных спермиев.

После разбавления сперму расфасовывают по 0,4 мл в стерильных условиях вакуумным способом. Для этого необходимое количество промаркированных соломинок (от 100 до 500 шт. в зависимости от количества спермы) ставят открытыми концами вниз в стеклянную плоскодонную посуду со спермой в помещают в анаэростат, из которого насосом вначале откачивают воздух до давления 0,95 атм., а затем впускают его.

Воздух нагнетает сперму в соломинку. Заполненные спермой пайетты зажимают в специальном держателе, при температуре 25° погружают в герметизирующий состав и закрывают второй конец. После герметизации соломинки помещают на медное сито (корзинку) и переносят в пары жидкого азота стационарного хранилища.

Корзинку с соломинками опускают в хранилище до соприкосновения с поверхностью азота. Вскипание азота образует ток холодного газа, который охлаждает и замораживает сперму до 100—130° в течение 5 мин. Соломинки с замороженной спермой переносят в стаканчики, помещают в канистры и закладывают в хранилище с жидким азотом.

Замороженную в соломинках сперму перед использованием оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38—40°) в течение 12—14 с. Независимо от метода замораживания сперму оттаивают и проверяют на подвижность спермиев сразу после замораживания, второй раз — через сутки, третий — через 7—10 дней и четвертый раз — через 14—20 дней.

Замороженная сперма для дальнейшего хранения допускается при подвижности спермиев не ниже 4 баллов. Для оценки оттаянной спермы в пайеттах (выборочно) производят смешивание ее из одной соломинки с равным количеством изотонического раствора лимоннокислого или бикарбоната натрия.

Для этого один конец соломинки обрезают ножницами и опускают в раствор, а затем этими же ножницами обрезают и второй ее конец. Полученную смесь спермы и раствора перемешивают соломинкой и с ее помощью берут каплю для оценки. Для осеменения используют сперму не раньше 14—20 дней после замораживания. Оттаявшую сперму вновь замораживать нельзя.

Для оценки спермы, хранившейся при температуре 2—4°, каплю спермы наносят на предметное стекло и рядом с ней наносят каплю 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия или 1%-ного раствора бикарбоната натрия, затем обе капли, не смешивая, закрывают покровным стеклом.

Техника безопасности при работе с сосудами Дьюара При работе с жидким азотом надо закрывать незащищенные участки тела, так как он вызывает обморожение. Работать следует в защитных очках или щитках из органического стекла, на руки надевать брезентовые (асбестовые, кожаные) рукавицы или перчатки.

Незащищенный участок тела, на который попал жидкий азот, бистро обливают водой. При заливке жидким азотом неохлажденного сосуда нельзя заглядывать в горловину сосуда, так как при этом может произойти выброс жидкого азота вследствие образования большого количества газа. Повышение концентрации азота в воздухе вызывает головную боль, головокружение и потерю сознания.

Поэтому помещения, где хранят жидкий азот, оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией. При обморочном состоянии пострадавшего немедленно выносят на свежий воздух. Нельзя плотно закрывать сосуды Дьюара. При транспортировке сосудов с азотом их следует хорошо фиксировать. При перевозке автотранспортом сосуды заливают наполовину гидравлической емкости.

Во избежание взрыва сосуды отогревают в изолированном помещении.

Для предотвращения накопления взрывоопасной смеси в емкости содержание кислорода следует контролировать с помощью переносного газоанализатора ГХП-3: в хранилищах—1 раз в год, на пунктах—1 раз в 6 месяцев. После накопления кислорода в количестве 15% сосуд необходимо опорожнить в месте, очищенном от предметов органического происхождения: дерева, бумаги, тряпок (особенно промасленных), навоза и пр.

Источник: http://fermer02.ru/animal/cow/2594-zamorazhivanie-i-dlitelnoe-xranenie-spermy-byka.html